这些细胞冻存和复苏的坑，怎么破？这几个

ningxueqin528

　　1、复苏时遇到冻存时挖的坑

　　实验室偶尔也会发生这样的情况：

　　“靠，细胞要死了，赶紧冻掉，不能让细胞死在我手里。”

　　“天呢，细胞培养液都这么黄了，赶紧冻掉。”

　　“妈呀，细胞融合度都逼近100%了，赶紧冻掉。”

　　“咦，细胞好像少了点，算了，就这样吧。”

　　如果你复苏的细胞就是上面这些人所留下来的，那就要格外注意了。

　　● 解决方法：

　　所谓知己知彼才能百战不殆，在复苏前，一定要先清楚地了解这份细胞的增殖能力。如果增殖能力不高，接种时就要增加细胞接种密度并添加5%——10%的血清。如果细胞本身数量就非常少，也可以不离心，[url=http:///www.pall.cn/zh_cn/medical/cord-blood.html]冻存袋[/url]直接接种培养（加入培养基的体积＞5倍的冻存细胞体积）。复苏后3天内尽量少对细胞进行操作，延迟换液时间。

　　2、无孔不入的微生物

　　做实验就像走钢丝，稍不留神就会跌进充满微生物的沼泽中不能自拔。

　　● 解决办法：

　　冻存时，一定要拧紧冻存管的盖子，否则水浴复苏的时候，水浴锅中的水就会渗入到冻存管中去，造成细胞的污染并会使那些低免疫力的接受移植的患者产生严重的感染。

　　3、细胞非正常“复苏”

　　那是一个安静的下午，大家都在专心地做着实验，突然听到有人大叫“这是谁的细胞，一直放在外面，都化了。”原来刚才同事取细胞的时候，把整个冻存架都拿了出来，后来居然忘记再把它放回液氮罐中。而此时细胞们已经无一幸免地 “融化了”。

　　● 解决办法：

　　马上种瓶，千万不要把这些细胞继续放回液氮罐中冻存。此时细胞内已经有大量的冰晶形成，细胞膜已经受到损伤，如果离心就会造成细胞膜完全破碎、细胞立即死亡的后果。所以切记不要离心，而应直接种瓶，也不要进行吹打，只轻轻摇晃。培养时加入10%的血清，种瓶后48h内都不要对细胞进行操作。这是一个真实的案例，后来在大家的努力下，那些增殖能力本来就旺盛的细胞还是活了下来。