染色体畸变试验的方法

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[color=#000][font=Arial, Verdana, sans-serif][size=12px] [/size][/font][/color][color=rgb(109, 148, 189)][font=&quot][size=12px][url=http:///www.illumina.com.cn/techniques/popular-applications/cytogenomics.html]染色体畸变[/url][/size][/font][/color][color=#000][font=&quot][size=12px]是基因突变的一种形式，通常后果比较严重。可用外周血淋巴细胞，或人和哺乳动物体细胞系作为材料进行检测，常用的体细胞系有中国地鼠卵巢细胞(CHO)，中国地鼠肺成纤维细胞(V79和CHL)，人胚肺2倍体成纤维细胞等。[/size][/font][/color][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　一、染色体畸变试验原理[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　外周血中小淋巴细胞几乎都处在细胞增殖周期的G。期或G。期(不同于体外培养的体细胞)。一般条件下是不会再分裂的。当在培养物中加入适量的植物血凝素(phytohernagglu—tinin，PHA)，37℃培养52～72h后，淋巴细胞开始转化，进入细胞增殖周期，此时可获得大量的有丝分裂细胞。再经过秋水仙素处理，低渗、固定，即可在显微镜下观察到良好的中期染色体分裂象。电离辐射，化学有害物质作用于机体或体外细胞，均可引起细胞染色体的损伤，且损伤与剂量(浓度)呈良好的线性关系。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　染色体畸变试验[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　二、材料与方法[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　(一)染色体畸变试验材料[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　1.受试材料：外周血淋巴细胞。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　2.RPMI 1640培养液，含20%小牛血清。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　3.肝素：用生理盐水配成500U/ml，4℃冰箱内保存备用。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　4.秋水仙素：用0.85%生理盐水配成40μg/ml浓度，过滤后4℃冰箱保存。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　5.促细胞分裂剂：植物血凝素(PHA)。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　6.KCl低渗液：配制75mmol/L KCl水溶液。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　7.固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)。[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　(二)染色体畸变试验方法[/size][/font][/color][/align][align=left][color=#000][font=&quot][size=12px]　　1.受试物的处理实验分组，至少设立五个组，即阳性对照、阴性(溶剂)对照及三个剂量组。zui高剂量和zui低剂量之间相差10倍，中间再设一个剂量，阳性对照物为已知的染色体断裂剂，如C(mitomycin c，MMC)，剂量为o.02μg/ml;黄曲霉素毒素Bl，浓度为10-6 M等。每组中应设2～3个平行样品。[/size][/font][/color][/align]